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抗體檢測(cè)試劑盒出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果原因分析News
抗體檢測(cè)試劑盒出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果原因分析
更新時(shí)間：2019-05-15 點(diǎn)擊次數(shù)：1704次
抗體檢測(cè)試劑盒出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果原因分析
抗體檢測(cè)試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種高敏感性的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，加入一種試劑孵育后，可以經(jīng)過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，在包被單抗的微孔中加入，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。
抗體檢測(cè)試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度。
抗體檢測(cè)試劑盒分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：
1．內(nèi)源性物質(zhì)
普遍認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，會(huì)造成不同程度的影響檢測(cè)結(jié)果。一般的干擾物質(zhì)有：補(bǔ)體、嗜異性抗體等。
?。?）補(bǔ)體
抗體檢測(cè)試劑盒中固相一抗和標(biāo)記二抗的過(guò)程當(dāng)中，抗體分子會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，F(xiàn)C段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被顯示出來(lái)，使C1q 將二者連接在一起，造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（2）嗜異性抗體
人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如鼠等）Ig （s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可以把ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接在一起，也會(huì)造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig （s） ，但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。
2．外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是由于用于抗體檢測(cè)試劑盒的血標(biāo)本的采集、貯存不當(dāng)?shù)仍蛩?。如?biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染等。
（1）標(biāo)本溶血
由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測(cè)定結(jié)果。為克服上述干擾，標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
?。?）標(biāo)本被細(xì)菌所污染
菌體中可能會(huì)含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，所以，被細(xì)菌污染的標(biāo)本和溶血標(biāo)本一樣，可產(chǎn)生非特異性顯色干擾測(cè)定結(jié)果。
